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奶牛乳房炎防治技术指南(试行)
 

       奶牛乳房炎(Mastitis)是奶牛乳腺组织的炎症,它的发生与病原微生物、奶牛自身因素、环境因素、管理因素及遗传因素等密切相关,是奶牛最常见也是造成经济损失最严重的疾病之一。同时,治疗乳房炎时使用抗生素,可能诱导产生抗药菌株并带来抗生素残留问题。有效控制乳房炎对于提高奶牛生产效益、减少经济损失具有重要意义。
       为预防和控制奶牛乳房炎,依据《中华人民共和国动物防疫法》、《中华人民共和国食品卫生法》、《重大动物疫情应急条例》、《乳品质量安全监督管理条例》、《国家突发重大动物疫情应急预案》、《生乳》(GB19301-2010)、《生鲜乳生产技术规程》、《无公害食品奶牛饲养管理准则》、《奶牛场卫生及检疫规范》、《无公害食品奶牛饲养兽医防疫准则》及有关规定,制定本防治技术指南。
       1 适用范围
       本指南规定了奶牛乳房炎的诊断、监测、报告、预防、治疗和应急处置的操作程序、技术标准和保障措施。
       本指南适用于中华人民共和国境内一切与奶牛乳房炎防治有关的活动。
       2 诊断
       2.1 流行病学特点
       奶牛乳房炎的发生受多种因素的影响,饲养管理中饲养环境状况、挤奶卫生条件、程序及护理措施的规范程度都与乳房炎的发生密切相关。乳房炎的发生与牛只自身因素如胎次、泌乳阶段有相关性,23胎后,随着产犊胎次的增加,患病机会增加;随着泌乳时间的腾博会app怎么下的啊,患病机会增加;分娩期的感染率较其它时期高数倍。本病的发生与气候和季节变化也有一定关系,多发于雨季、酷暑及寒冬。
       2.2 发病原因
       诱发乳房炎的因素主要有以下几个方面:
       2.2.1饲养管理
       环境卫生状况较差、饲养管理水平低下、挤奶设备使用不正确、挤奶程序不规范、不注意挤奶卫生等是诱发乳房炎的重要原因。
       2.2.2病原微生物
       引起乳房炎的病原微生物主要包括细菌、真菌、病毒、支原体。根据病原的来源和传播方式可分为接触传染性病原体和环境性病原体两类。前者主要包括无乳链球菌、停乳链球菌、金黄色葡萄球菌、支原体等;后者主要包括大肠杆菌、沙门氏菌、肺炎克雷伯菌等。临床病例中,链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌最为常见。
       2.2.3其它因素
    季节、气候、遗传因素以及其它疾病等都对乳房炎的发生有一定影响。
       总之,引起乳房炎的因素在很多情况下都是多重性的,在诊断时应全面考虑。
       2.3 诊断
       2.3.1临床诊断
       乳房炎按临床表现可分为临床型和亚临床型(通常称为隐性乳房炎),临床型又可分为急性型、亚急性型和慢性型。
       2.3.1.1 急性乳房炎。突然发病,乳房发红、肿胀、变硬、疼痛,乳汁显著异常和减少,出现全身症状。病牛体温升高,食欲减退,反刍减少,脉搏增速,脱水,全身衰弱、沉郁。当病情发展很快且症状严重时为最急性乳房炎,此时可危及患牛生命。
      
2.3.1.2 亚急性乳房炎。病牛一般没有全身症状,最明显的异常是乳汁中有絮片、凝块,并呈水样。乳房有轻微发热、肿胀和疼痛。
       2.3.1.3 慢性乳房炎。慢性乳房炎多由长时间持续感染引起,或由于急性乳房炎未及时进行有效治疗而转来。长期保持亚临床型乳房炎,或亚临床型和临床型交替出现,临床症状长期存在。最终可导致乳腺组织纤维化,乳房萎缩、出现硬结。这类乳房炎治疗价值不大,而且是牛群中的感染源,应及早淘汰。
       2.3.1.4 亚临床型乳房炎。患牛的乳房和乳汁肉眼观察无异常,但乳汁理化性质发生变化,乳汁体细胞数增加。隐性乳房炎患牛是病原携带者,可以感染其它健康牛。由于临床症状不明显,易被忽视而造成奶量损失和健康牛感染的危险。
       2.3.2实验室诊断
       2.3.2.1 临床型乳房炎
    临床型乳房炎主要根据临床症状进行诊断。病原微生物实验室诊断见附件12
       2.3.2.2 亚临床型乳房炎
    检测方法包括乳汁体细胞计数法(CMT和体细胞直接计数法)、乳汁pH检验法、电导率值检验法、酶类检测法和乳成分直接检测法。本指南主要介绍体细胞计数法。检测方法参见附件34,可以选择其中之一进行。
       如需进行病原微生物的检测,参见附件12
       3监测与报告
       3.1 奶牛饲养单位或个人每月应对亚临床型乳房炎进行监测,并根据监测结果采取相应措施,监测记录存档;对临床型乳房炎要准确诊断,及时治疗,并保存诊疗记录。大规模发生临床型乳房炎时,要及时向当地兽医主管部门报告。
       3.2兽医主管部门应对乳房炎发病及监测情况进行定期监控。
       4处置
       4.1 临床型乳房炎处置
       4.1.1隔离
       对患病奶牛实施隔离,对病牛接触过的一切用具及环境进行彻底消毒。
       4.1.2治疗
       对已经确诊的病牛,应根据病因素采取有效治疗措施,按照对症治疗、局部治疗、抗感染和辅助性治疗相结合的原则,防止病原扩散。
       4.1.2.1抗感染治疗:可选用抗感染药物治疗。治疗前应进行乳汁采样、病原培养、药敏实验以确定所使用药物的种类。
       4.1.2.2对症治疗:解热、镇痛、抗过敏。
       4.1.2.3 辅助性治疗:缓解乳房的肿胀,可采用乳房基部封闭、乳房按摩、增加挤乳次数、乳房冷敷、外敷药物等。
       4.1.3牛奶处理
       临床型乳房炎奶牛的奶要挤入专用容器内,集中销毁,应严格执行休药期和弃奶规定;对发病区的奶源进行严格监测,防止病原污染牛奶进入制冷罐、乳品加工企业和消费市场。
       4.2 亚临床型乳房炎处置
       4.2.1奶牛的处置
     对已诊断为亚临床型乳房炎的病牛应隔离观察。长期CMT阳性、乳汁表现异常、产奶量低、反复发作的病牛,要及时淘汰。干乳前10天进行隐性乳房监测,对阳性反应在“++”以上的牛及时治疗,干乳前3天再监测1次,阴性反应方可停乳。
       4.2.2牛奶的处置
       应严格执行休药期和弃奶规定。
       4.3 消毒
       选用合适的药物药浴乳头;对病牛污染的场所、用具、物品,特别是挤奶设备进行清洗和严格消毒,消毒方法见附件5
       5 预防措施
    坚持预防为主、防治结合的原则,创造良好的卫生环境,采取科学的管理方法,执行正确的挤奶程序,以减少奶牛乳房炎的发生。
       5.1创造良好的卫生环境
    良好的卫生环境是预防乳房炎的关键。牛舍、运动场要设计合理,空间宽敞,保持腾博会app怎么下的啊充足;牛床要保持清洁、干燥,垫草应干、软、清洁、新鲜,经常更换。要定期对牛舍和运动场进行消毒,乳房炎高发季节应加强消毒。
    兽医部门应加强对奶牛场动物防疫条件审查与监督管理。
       5.2 加强饲养管理
    根据奶牛的营养需要,执行规范化饲养,各生产阶段精、粗饲料搭配合理,全面供应,增加青绿、青贮料的饲喂量,以奶定料,维持机体最佳生理机能。停乳后要随时观察乳房,发现异常应立即处理;在干奶后期应适当增加精料的饲喂量;为减轻乳房水肿,要适当控制盐的摄入量和多汁饲料的喂量。在饲养管理过程中要避免应激。同时,还要适当增加奶牛的运动,以增强机体抗病力。
    在干奶期,每头奶牛每天供应1.0g维生素E,和每公斤日粮不超过0.3mg的硒。
       5.3 规范挤奶操作
    挤奶操作建议采用两次药浴,纸巾干擦
       5.3.1挤奶前检查:挤奶前先观察或触摸乳房外表是否有红、肿、热、痛症状或创伤。
       5.3.2乳头预药浴:选用专用的乳头药浴液,对乳头进行预药浴,药液作用时间应保持在2030秒。(注:乳房污染严重时,可先用含消毒剂的温水清洗干净,再药浴乳头)
       5.3.3擦干乳头:药浴后用一次性纸巾擦干乳头和基部,要求每头牛至少1张。
       5.3.4挤头2-3把奶:把头2-3把奶挤到专用容器中,检查牛奶是否有凝块、絮状物或呈水样,牛奶正常的牛方可上机挤奶;异常的,应及时报告兽医进行治疗,单独挤奶,严禁将异常奶混入正常牛奶中。
       5.3.5上机挤奶:上述工作结束后,及时套上挤奶杯组(套杯过程中尽量避免空气进入杯组中),奶牛从进入挤奶厅到套上奶杯的时间应控制在90秒内。挤奶过程中观察真空稳定情况和挤奶杯组奶流情况,适当调整挤奶杯组的位置。排乳接近结束,先关闭真空,再移走挤奶杯组。严禁下压挤奶机,避免过度挤奶。
       5.3.6挤奶后药浴:挤奶结束后,应迅速进行乳头药浴,停留时间为35秒。
       5.4 定期检查
       加强对乳房炎的监控,每月对每头泌乳牛进行奶牛乳房炎检测。
       5.5 干奶期预防
    干奶前首先进行隐性乳房炎检测,阴性奶牛方可进行干奶。提倡一次性干奶。乳汁挤净后,向每个乳区注入适量的干奶药。  
      
       附件1 

       金黄色葡萄球菌的检验

       1 主要试剂和试验方法:
       1.1 革兰氏染色:
       1.1.1涂片、火焰固定。
       1.1.2草酸铵结晶紫染1min
    草酸铵结晶紫染液的配制:
       溶液A:结晶紫2g95%酒精20mL,溶液B:草酸铵0.8g,蒸馏水80mL。将AB溶液混合,用滤纸过滤后即可使用。
       1.1.3自来水冲洗。
       1.1.4加碘液覆盖涂面染约1min
       1.1.5水洗,用吸水纸吸去水分。
       1.1.695%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,20s后水洗,吸去水分。
       1.1.7沙黄液(稀)染2min后,自来水冲洗。干燥,镜检。
       革兰氏阳性菌染色为蓝色,革兰氏阴性菌染色为红色。
       1.2 触酶试验:取槽置于腾博会app怎么下的啊的试管内或玻片上,然后加3%过氧化氢数滴;或直接滴加3%过氧化氢于不含血液的细菌培养物中,立即观察结果。有大量气泡产生者为阳性,无则为阴性。
       1.3 血浆凝固酶试验:吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌浸液肉汤24h培养物充分混匀,置36±1°C培养,每隔半小时观察一次,连续观察6h,出现凝固,即将小试管倾斜或倒置时,内容物不流动,判为阳性。同时做阴阳性对照。
       2 乳样的采集
       选取出现临床症状(或者怀疑为亚临床型乳房炎)乳房炎奶牛,先用温水,再用0.2%新洁尔灭擦洗乳房,最后用70%的酒精擦拭乳头。采样者同时进行手指擦拭消毒。每个乳室先挤去头23把奶,以排除污染的杂菌,每头奶牛取乳样5mL于无菌乳样杯中,待检。
       3 病原菌的分离培养
       初步诊断:将少量乳汁涂片、革兰氏染色、镜检。如可见圆球形革兰氏阳性细菌可怀疑为葡萄球菌。
       分离培养:将乳样摇匀,分别取适量接种于营养肉汤(10%血清)、鲜血琼脂、麦康凯琼脂培养基(平板)后,置于37℃温箱培养2448h。观察每个平板中细菌生长的情况,记录菌落生长表现。
       普通琼脂平板上,37℃2472h培养后,可见到湿润、光滑、隆起的圆形金黄色菌落。挑取典型菌落涂片、染色、镜检(镜检呈葡萄状排列,无芽胞、荚膜,直径0.51μm,革兰氏染色阳性),并挑取单个可疑菌落移植于肉汤和斜面培养基,经37℃培养2448h24h后没有长菌的平板,再用相应的增菌肉汤涂划一次,继续培养,2448h后,再作检查,以防漏检。将剩余的乳样存放于4℃冰箱内备用。 营养肉汤中呈浑浊生长,管底有少量灰白色沉淀;血液琼脂平板中菌落较大,呈金黄色、圆形,周围出现明显的β-溶血。
       4 生化鉴定
       触酶试验:触酶阳性
       血浆凝固酶试验:凝固酶试验阳性
       糖发酵试验:能分解甘露醇、乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖
       色素产生情况:能产生金黄色色素
       5 毒力试验
       将上述经过生化试验鉴定的细菌悬液用灭菌生理盐水作适当稀释,对随机分组的小鼠进行腹腔注射接种,接种量为0.5mL/只(家兔皮下接种1.0mL或者静脉接种0.10.5mL),能够致死动物或者内脏出现脓肿可以确定有毒力。
       6 病原菌的重分离试验
       对接种后发病、死亡小鼠(家兔)的肝脏进行病原菌重分离。进行菌落涂片、革兰氏染色、显微镜检查,观察所分离菌株是否为原接种菌。如果是则进一步确定病原菌为金黄色葡萄球菌。
       附件2 

链球菌的检验

        引起临床型乳房炎或者亚临床型乳房炎的链球菌常见的有无乳链球菌、停乳链球菌以及乳房链球菌。
        1 主要试剂和试验方法
        CAMP试验:在血琼脂平板上用金黄色葡萄球菌培养物划一条直线,然后将链球菌培养物划一条线,与金黄色葡萄球菌培养物的划线相互垂直,但不要接触,二者相距35mm,各链球菌分离菌划线间距1020mm。置37℃温箱内培养24h后观察结果。在两划线交界处出现箭头样的溶血区为阳性。
        2 乳样的采集
        选取出现临床症状(或者怀疑为亚临床型乳房炎)乳房炎奶牛,先用温水,再用0.2%新洁尔灭擦洗乳房,最后用70%的酒精擦拭乳头。采样者同时进行手指擦拭消毒。每个乳室先挤去头23把奶,以排除污染的杂菌,每头奶牛取乳样5mL于无菌乳样杯中,待检。
        3 病原菌的分离培养
        初步诊断:将少量乳汁涂片、革兰氏染色、镜检。如可见圆球形革兰氏阳性细菌可怀疑为链球菌。
        分离培养:将乳样摇匀,分别取适量接种于营养肉汤(10%血清)、鲜血琼脂、麦康凯琼脂培养基(平板)后,置于37℃温箱培养2448h。观察每个平板中细菌生长的情况,记录菌落生长表现。 普通琼脂平板上,37℃2472h培养后,未见到菌落。鲜血琼脂平板上长有灰白色、半透明表面光滑圆形隆起的小菌落,出现溶血现象,如果是β溶血则疑为无乳链球菌,如果为α溶血,疑为停乳链球菌或者乳房链球菌,如为γ溶血,则疑为乳房链球菌。血清肉汤中生长初呈均匀浑浊,管底出现絮状沉淀,上清变得透明。挑取典型菌落涂片、染色、镜检,镜检如呈球状,短链状或者长链状排列,无芽胞、荚膜,革兰氏染色阳性则疑为链球菌。
        4 生化鉴定
        镜检形态符合链球菌特性,且接触酶试验阴性细菌,即鉴定为链球菌属细菌。若细菌CAMP试验阳性,不水解七叶苷和马尿酸钠,即鉴定为无乳链球菌;若细菌CAMP试验阴性,不水解七叶苷和马尿酸钠,即鉴定为停乳链球菌;若细菌CAMP试验阴性,水解七叶苷和马尿酸钠,即鉴定为乳房链球菌。
        5 动物试验
        对实验动物,只有停乳链球菌具有致病性,将其18h血清肉汤培养物0.5mL注入小白鼠腹腔,或给家兔静脉接种12mL,可使动物在1周内死亡。对接种后发病、死亡小鼠(家兔)的肝脏进行病原菌重分离。进行菌落涂片、革兰氏染色、显微镜检查,观察所分离菌株是否为原接种菌。如果是则进一步确定病原菌为停乳链球菌。其他两种链球菌并不能使试验动物致死。
        附件3 

乳汁体细胞计数法
        推荐使用体细胞计数仪进行乳汁体细胞计数。
        体细胞计数法有直接计数法和间接计数法。直接计数法中简便易行的方法是直接用显微镜进行体细胞计数(SCC),间接计数法就是后面提到的CMT法。
        1 主要试剂和材料
        美蓝染色液:美蓝乙醇饱和溶液30mL(美蓝2g95%乙醇100mL),10%氢氧化钠溶液0.1mL,蒸馏水100mL,将上列溶液混合摇匀,过滤后备用。二甲苯、95%乙醇。生物显微镜、载玻片、10μL 微量加样器(或移液枪)等。
        2 操作方法
        2.1 涂片制备
        涂布:充分摇匀新鲜乳样,用10μL 微量加样器吸取中部乳汁10μL ,或用接种环蘸取等量的乳汁,将乳样滴于玻片一端中侧,仔细涂布成约1cm2面积的乳膜(为便于操作,可在玻片下垫衬一张硬纸板,纸板上用毛笔划数个面积为1cm2的方格透视)。干燥、脱脂、固定:涂好乳膜的玻片于37℃温箱中干燥,然后用二甲苯脱脂5min,再置95%乙醇中固定510min
        染色:玻片干燥后,用美蓝染色液染色5min。水洗,再用95%乙醇脱色数分钟,水洗干燥后镜检。
        镜检及计数:在生物显微镜油镜下观察(最好用10×目镜,其视野直径要求为0.016),计数100个视野内的细胞数,然后用下式计算:SCC=100×N/πr2视野面积πr2=3.1416×(0.016/2)2=0.0002cm2显微镜系数N =1/0.0002×100=500,000SCC=系数×每个视野的细胞平均数 (即细胞总数÷100)=细胞数/mL乳。
        3 判定标准
        随着国际和国内乳品行业的接轨,国内标准也在提高,一般以每毫升牛奶中含20万个细胞为亚临床乳房炎的临界值(+);超过该值为阳性,低于该值则正常。
        附件4 
加州乳房炎检测法(CMT)
        CMT是加州乳房炎试验的简称,即首先在美国加利福尼亚州使用的一种乳房炎检测试验。它是通过间接测定乳腾博会app怎么下的啊细胞数(SCC)来诊断隐性乳房炎的方法。其原理是在表面活性物质和碱性药物作用下,乳腾博会app怎么下的啊细胞被破坏,释放出DNA,进一步作用,使乳汁产生沉淀或形成凝胶。体细胞数越多,产生的沉淀或凝胶也越多,从而间接诊断乳房炎和炎症的程度。该法是国际腾博会app怎么下的啊的隐性乳房炎诊断方法,其特点是简便、快速。我国研制出了类似的方法如BMT(北京奶牛研究所)、SMT(腾博会app怎么下的啊奶牛研究所、HMT(黑龙江腾博会app怎么下的啊兽医科学研究所),以及LMT(中国农科院兰州兽医研究所)等。
        1 试剂和方法
        CMT检测中用到的试剂和方法如下:十二烷基磺酸钠30g溶解于1000mL蒸馏水, 2M的氢氧化钠调节PH等于6.4,加入溴甲酚紫0.1g,即成CMT检验液, 取乳房炎诊断盘1只,滴加被检乳2mL,诊断液2mL,缓缓作同心圆状摆市售成品CMT诊断试剂或者其他方法的成品试剂,按照说明操作。
        2 判定标准:可以参考表1
1 CMT法的判定方法及标准
 
反应判定
被检乳
反应状态
体细胞数
(千/毫升)
阴性
混合物呈液体状,倾斜检验盘时,流动流畅,无凝块
0200
±
可疑
混合物呈液体状,盘底有微量沉淀物,摇动时消失
200500
弱阳性
盘底出现少量黏性沉淀物,非全部形成凝胶状,摇动时,沉淀物散布于盘底,有一定的黏性
500800
++
阳性
全部呈凝胶状,有一定黏性,回转时向心集中,不易散开
8005000
+++
强阳性
混合物大部分或全部形成明显的胶状沉淀物,黏稠,几乎完全黏附与盘底,旋转摇动时,沉淀集于中心,难以散开
>50
 
 

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